有些萌新們拿到液相柱不定時(shí)的會(huì )遇到些壓力問(wèn)題，我們在線(xiàn)教學(xué)如何處理此類(lèi)問(wèn)題！
這是收藏級干貨 || 如何解決背壓增加&堵塞或污染問(wèn)題？
請注意系統的運行壓力限，以及是否有程序設定的壓力限。請查閱儀器操作手冊以獲取此信息。程序設定時(shí)，請勿超過(guò)系統運行壓力限。常規HPLC系統（非UHPLC）的工作壓力極限通常在5800 – 7000 psi（400 – 500 bar）的范圍內，這也適用于HPLC色譜柱和全多孔的填料。物理壓力限通?；陂y門(mén)，泵和其他組件的額定值來(lái)確定，超過(guò)此壓力，會(huì )發(fā)生泄漏。還請大家記住，比如：甲醇和水之類(lèi)的溶劑會(huì )產(chǎn)生更高的背壓。通常，對于3μm或5μm粒徑的全多孔色譜柱，建議不要超過(guò)6000 psi。另一方面，色譜分辨率更多取決于實(shí)際要求，具體取決于可以為您提供可接受的科學(xué)數據結果。下表可用于確定*佳流速，以使色譜柱獲得*佳分離度。它還提供了乙腈或甲醇可能產(chǎn)生的色譜柱壓力的預估值。 請記?。好總€(gè)色譜柱的實(shí)際壓力會(huì )有所不同，通常會(huì )隨使用時(shí)間而略有增加。并且，壓力讀數是總壓力的反映，其中包括系統本身的任何固有背壓。3. 在沒(méi)有HPLC柱的情況下監控系統壓力在安裝色譜柱之前，用兩通連接器換下舊色譜柱，并讓系統運行一次。 在此配置中記錄系統壓力并將其保留在文件中以供參考。 不時(shí)檢查一下，如果有增加，則表明流路中有堵塞。通過(guò)檢測這種變化，您可以防止超壓的錯誤和潛在危機。一旦您安裝了色譜柱，運行方法穩定，記錄對應流動(dòng)相和流速條件的相應壓力。 這將被用作基線(xiàn)，作為您的色譜柱壽命的參照。 劃重點(diǎn)：以下內容僅適用于全多孔粒子（FPP），而不適用于Raptor色譜柱（SPP）。
注：柱內徑單位：㎜，柱長(cháng)度單位：㎜，粒徑單位：μm，*佳流速：mL/min，乙腈的預估壓力：（psi）@30°C，甲醇的預估壓力：（psi）@30°C
如果您一根色譜柱使用了一段時(shí)間，與新色譜柱壓力相比，發(fā)現壓力增加，您需要查看此壓力來(lái)自何處，也許是來(lái)自色譜柱，也許不是。收藏級干貨 || 如何解決背壓增加&堵塞或污染問(wèn)題？
那么可以通過(guò)以下步驟確定（敲黑板，劃重點(diǎn)?。?/span>
A. 將柱出口連接斷開(kāi)，將出口管直接放入廢物瓶或燒杯中。
打開(kāi)泵，然后觀(guān)察并記錄壓力。
還要注意從色譜柱中流出的任何微?；蛴猩镔|(zhì)。
連續泵20分鐘或直到色譜柱不再流出可見(jiàn)物質(zhì)。
再次觀(guān)察壓力，看看它是否已更改，然后記錄數值。
如果在20分鐘后仍有可見(jiàn)物質(zhì)流出色譜柱，請拆下并更換柱子。
B. 如果在步驟A中斷開(kāi)色譜柱后，壓力立即恢復到該色譜柱的正常范圍（上述步驟4記錄的），且沒(méi)有可見(jiàn)殘留物流出，則表明色譜柱后的流路中有堵塞，可能是在通向檢測器的管道或閥門(mén)的某處，也可能是在檢測器流動(dòng)池中。
按照儀器制造商的建議，根據需要更換管道和/或清潔流動(dòng)池。
檢查所有配件和閥門(mén)的裝配是否正確，并確保管道沒(méi)有壓扁。
檢查緩沖鹽是否有積聚，并根據需要清潔或更換部件。
C. 如果在進(jìn)行步驟a之后，沒(méi)有觀(guān)察到殘留物，壓力沒(méi)有顯著(zhù)降低，取下色譜柱并換成兩通連接器。
泵穩定后，將壓力與上述的步驟3中記錄為基線(xiàn)的壓力進(jìn)行比較。
如果系統壓力接近之前的步驟3中的數值，那么您已經(jīng)確認了壓力的增加來(lái)自于色譜柱，*可能是顆粒堵塞了柱入口篩板。
對于3μm和5μm粒徑的全多孔粒子柱，嘗試使用流動(dòng)相反沖色譜柱30分鐘，出口連入廢物瓶。 （請注意，對于1.9μm UHPLC色譜柱或Raptor色譜柱，不建議反沖）。
如果壓力仍然高，請使用一系列具有不同極性的溶劑重復反沖。
如果您使用的流動(dòng)相含有緩沖溶劑，用含有大量水（對典型的C18相，用60-90％），不含緩沖鹽、酸或改性劑的溶液。請小心使用氯化溶劑，因為PEEK材料可能略有膨脹。
如果反沖不能降低背壓，那么*可能是顆?；蚧钚曰衔锱c柱子發(fā)生了不可逆地結合，則需要更換。
同樣，如果按這些步驟并正向沖洗1.9μm UHPLC色譜柱或Raptor色譜柱，沒(méi)有解決問(wèn)題，那么您的色譜柱可能壽命到了，需要更換。
D. 如果在不接色譜柱的情況下檢查系統壓力，壓力高于之前不接色譜柱的壓力（參見(jiàn)上述步驟3），則系統中存在堵塞。 請查閱您的HPLC操作手冊或聯(lián)系HPLC儀器廠(chǎng)家。
為了避免將來(lái)發(fā)生這樣的問(wèn)題，我們強烈建議您使用保護柱，以保護您的液相色譜柱，避免篩板堵塞和色譜柱污染。
那么，請看下圖：
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