1、新柱柱效測試，為何塔板數明顯偏低？

·確保系統狀態(tài)正常，如有必要再沖洗一次。

·柱效受系統死體積擴散影響。沃特世(Waters®)色譜柱出廠(chǎng)測試是在體積zui小化的系統上進(jìn)行，塔板數較高。通常自測如能達到70%以上，就可以接受。

·色譜柱體積越小，系統死體積(管路、檢測器流通池)對柱效的影響就越大。對于小內徑色譜柱(2.1和3 mmid)、和/或短的色譜柱(≤10cm)，盡可能減少系統死體積(管路長(cháng)度/內徑、流通池)，并仔細檢查管路與色譜柱的連接。檢測器采樣頻率應設置為20 Hz。

·用什么條件和什么樣品測試的？峰保留時(shí)間越短，越容易受系統死體積影響。建議調整流動(dòng)相條件，使峰保留時(shí)間在10分鐘(常規HPLC系統)或5分鐘(UHPLC系統)。

·樣品進(jìn)樣體積越大，樣品溶劑會(huì )導致峰擴散。HPLC柱可進(jìn)樣1 μL，UPLC柱可進(jìn)樣0.1 μL。

2、新柱上機，基線(xiàn)一直不能平衡，怎么辦？

·首先斷開(kāi)檢測器，按照對色譜柱的高洗脫強度溶劑5倍柱體積或者重復5次梯度沖洗色譜柱，然后按照測試柱效的方法測試。

·無(wú)規律的噪音，可考慮是否有氣泡進(jìn)入檢測池，沃特世儀器用戶(hù)請撥打免費售后，獲得沖洗檢測池指導。

·規律性的上下波動(dòng)基線(xiàn)，可考慮是否泵混合效率不足，在泵后增加mixing loop，具體請咨詢(xún)儀器維修工程師。

·實(shí)驗室內的環(huán)境條件是否會(huì )干擾到儀器，以及色譜柱柱溫情況。

·如果基線(xiàn)緩慢上飄或下飄，檢查流動(dòng)相是否存在配制不均勻、或者在緩慢揮發(fā)的情況。

·更換同類(lèi)型的舊柱情況會(huì )如何？有時(shí)需要對新色譜柱進(jìn)行一定的老化(可以運行幾次梯度方法)。

3、新柱一進(jìn)樣峰就拖尾，是色譜柱已經(jīng)壞了嗎？

·檢查系統狀態(tài)正常，檢查管路與色譜柱連接無(wú)死體積。

·對新色譜柱進(jìn)行柱效測試，檢查是柱效問(wèn)題還是應用問(wèn)題(可向我們索取柱效測試標準品或標準品配方)。

 - 若柱效測試峰塔板數明顯偏低，請參考問(wèn)題1。

 - 若柱效測試結果正常，判斷為應用問(wèn)題。

請考慮：這根色譜柱是否適合這個(gè)應用項目？過(guò)去那根舊色譜柱在進(jìn)行這個(gè)項目測試時(shí)，色譜柱是否已經(jīng)被離子對條件或其他改性條件用過(guò)？

4、新柱不能重現舊色譜柱譜圖，是色譜柱的批次問(wèn)題嗎？

·新色譜柱是否需要老化或充分的活化平衡？舊色譜柱是否在測試項目以前經(jīng)歷過(guò)變性條件(如離子對試劑)？項目之前用過(guò)不同批次色譜柱測試并能重現嗎？

·如手頭有可用的舊柱，請對同一個(gè)樣品、同一系統、同一配制流動(dòng)相進(jìn)行平行比對(同1天或隔天)，建議每根色譜柱上。重復3次平行進(jìn)樣。如果兩根色譜柱上的各自3針進(jìn)樣譜圖均穩定重現(可完全重疊，沒(méi)有增減)，而兩根色譜柱的譜圖有所差異(個(gè)別峰的增加/丟失/分離改變)，可確認兩柱有差異?？赡茉擁椖織l件敏感，導致對色譜柱批次敏感(“挑批次”)。

·如有可能，優(yōu)化分析方法，并用至少兩根以上不同填料批次的色譜柱進(jìn)行方法重現性檢查。

5、新柱連續進(jìn)樣，保留時(shí)間不穩定，一直有漂移，怎么回事？

·色譜柱的平衡有沒(méi)有充分，尤其是使用離子對試劑的情況下。

·流動(dòng)相配制是否足夠均勻，比如磷酸鹽與乙腈需要劇烈震搖混合，超聲混合不充分。

·流動(dòng)相是否存在揮發(fā)性組分，導致緩慢變化。

·是否使用柱溫箱，或者色譜柱是否暴露在溫度變化較大的環(huán)境中(如空調風(fēng)口等)。

·親水作用色譜柱(如XBridge Amide柱，XBridge/Atlantis/CORTECS HILIC柱)，需要活化步驟，以及較長(cháng)時(shí)間的再平衡，請詢(xún)我們。

·進(jìn)行柱效測試，連續進(jìn)針，看保留時(shí)間是否漂移，確認儀器狀態(tài)是不是穩定的