有關(guān)如何延長(cháng)高效液相色譜 (HPLC) 色譜柱壽命的提示。

雖然高效液相色譜 (HPLC) 色譜柱的相對成本已經(jīng)隨著(zhù)時(shí)間的推移而降低，但延長(cháng)色譜柱壽命仍然是大多數實(shí)驗室的重要考慮因素。以下提示有助于保護您的色譜柱并顯著(zhù)延長(cháng)大多數固定相的使用壽命。

需要閱讀制造商有關(guān)色譜柱推薦壓力、洗脫液 pH 值和溫度操作范圍的文獻，并遵守這些范圍

請注意，較高的操作溫度通常與降低的pH操作范圍密切相關(guān)。在低pH值下，色譜柱降解的主要癥狀通常是柱效損失（峰展寬），而在高pH值下，峰拖尾和柱背壓增加。

每次啟動(dòng)洗脫液時(shí)，避免柱床的機械沖擊（掉落柱）并緩慢增加壓力和流速（1mL/min/min 是理想的）

大多數現代HPLC設備都能夠通過(guò)二級儀器設置自動(dòng)實(shí)現這種流量-壓力斜坡。由于壓力沖擊導致的床空洞通常通過(guò)分裂或非常嚴重的拖尾峰表現出來(lái)。如果替代品不易獲得，可以將色譜柱倒轉進(jìn)行分析；然而，色譜柱的效率可能會(huì )下降得更快，因為床zui終會(huì )向相反的方向坍塌，導致相同的色譜癥狀。

如果色譜柱變干，請使用至少含有 50% 乙腈的洗脫液非常緩慢地啟動(dòng)流速 (0.1mL/min/min)

如果懷疑“標準”（非“水溶液”或非極性嵌入相類(lèi)型）反相色譜柱因使用 100 %水性流動(dòng)相而出現相崩潰（縮短保留時(shí)間、效率低下），則應在高流速下重新激活色譜柱60 °C下的100 % 乙腈（注意不要從柱內剩余的洗脫液中沉淀任何固體緩沖液）。在這兩種情況下，可能需要50到1  00個(gè)柱體積才能正確重新平衡或重新激活相。

每次使用后應正確清洗色譜柱

推薦的洗滌程序可能是：

1、當前含量為90%乙腈，每2個(gè)柱體積為10%有機物，并保持10個(gè)柱體積（再次注意通過(guò)緩慢增加乙腈濃度來(lái)避免固體緩沖液沉淀，如此處推薦的那樣）。

2、每2個(gè)柱體積加入10%乙腈到50:50的乙腈-水并保持10個(gè)柱體積。

3、從系統中取出端蓋并存放。色譜柱的封端對于避免相變干非常重要。

人們可能會(huì )使用較舊的 HPLC 系統作為色譜柱“清洗站”，這可以在“實(shí)時(shí)”儀器上節省大量操作時(shí)間。

如果樣品可能含有顆粒物，請選擇具有適當篩孔尺寸的優(yōu) 質(zhì)在線(xiàn)過(guò)濾器；傳統色譜柱為 0.45 μm，U  HPLC色譜柱為0.2μm是典型值

如果樣品基質(zhì)或稀釋劑可能會(huì )損害吸附劑（例如，由于pH值）或者化學(xué)性質(zhì)特別臟或難以處理，則可以使用保護柱，并且該相應與分析柱的相匹配。在選擇保護柱的尺寸和連接到分析柱時(shí)要格外小心，以確保分離效率不會(huì )受到影響。

如果由于峰分裂或效率損失而懷疑色譜柱或篩板污染，可以反轉色譜柱的方向以進(jìn)行反沖洗，并且上述色譜柱洗滌程序是實(shí)現此目的的一個(gè)很好的“配方”

應將色譜柱從檢測器上拆下以避免結垢，并注意反向沖洗只能作為zui終的手段，并且可能無(wú)法達到色譜柱的原始效率。

請記住，柱體積可以使用估算π × r2 × L × 0.6（用于 HPLC 柱填充材料的硅?的近似間隙孔隙率）

因此，對于150×4.6mm色譜柱，這將近似為：

3.142×(2.3)2×150×0.6=1496μL或1.5mL