1、高效液相色譜柱
高效液相色譜柱系統由儲液器、泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測器、記錄器等幾部分組成。儲液器中的流動(dòng)相由高壓泵泵入系統，樣品溶液通過(guò)進(jìn)樣器進(jìn)入流動(dòng)相，由流動(dòng)相裝入色譜柱（固定相）。
由于樣品溶液中的組分具有不同的分配系數，因此在兩相中相對運動(dòng)時(shí)，經(jīng)過(guò)反復吸附-解吸分配過(guò)程后，各組分的運動(dòng)速度會(huì )加快。差異被分離成單獨的組分并依次從塔中流出。
2、高效液相色譜柱如何過(guò)濾流動(dòng)相和樣品？
流動(dòng)相通常由水或與有機溶劑混合的緩沖溶液制成。原則上，所有通過(guò)色譜柱的流動(dòng)相都應過(guò)濾，但在實(shí)際操作中，應根據具體情況而有所不同。
當有機溶劑為色譜純水、石英亞沸水或其他超純水時(shí)，在能保證水和有機溶劑質(zhì)量且有機溶劑質(zhì)量不受污染的情況下，過(guò)濾無(wú)更具有實(shí)際意義。當流動(dòng)相含有緩沖鹽時(shí)，過(guò)濾是必要的。緩沖液放置一段時(shí)間（視環(huán)境溫度而定，夏季一般不超過(guò)48小時(shí)，冬季一般不超過(guò)1周）。使用前應重新過(guò)濾。
制備的樣品試液必須經(jīng)過(guò)0.45μm（0.22μm更好）孔徑的濾膜過(guò)濾，然后才能注入流路系統。注意區分水系統和油系統。兩者不能混用，以免濾膜溶解造成污染。
色譜系統中裝有流動(dòng)相的容器和在線(xiàn)過(guò)濾器應定期清洗和更換，以防止過(guò)濾器因過(guò)載而無(wú)法過(guò)濾。
3、使用高效液相色譜柱需要注意什么？
當你得到一個(gè)新的高效液相色譜柱時(shí)，你必須先閱讀它的說(shuō)明，然后測量柱效，定期檢查柱效，保留新柱上得到的色譜圖，記錄條件，定期檢查譜帶展寬的儀器。
如應用于在線(xiàn)監測，應為色譜柱提供在線(xiàn)理化保護，如安裝在線(xiàn)過(guò)濾器、自裝填料高效液相色譜保護柱、預裝保護柱等。在線(xiàn)過(guò)濾器的作用是防止顆粒在柱頭堆積。優(yōu)點(diǎn)是基本不影響柱效。它通常用于需要高柱效的情況。
經(jīng)常更換的耗材是濾芯和保護色譜柱的墊圈。作用是防止色譜柱受到化學(xué)污染。缺點(diǎn)是大多數保護柱都會(huì )影響色譜柱的柱效，尤其是在使用微柱時(shí)，常用的是普通自裝填料的保護柱。一些新型保護柱的特點(diǎn)是質(zhì)量好、填料效率高、分析柱效率提高、臟樣品負載量大，可以延長(cháng)保護柱的使用壽命。
連接器可以用手擰緊，不需要工具。節省時(shí)間 可以使用多種不同的填充物，主要適用于臟的、復雜的樣品背景，如生化樣品、環(huán)境樣品、食品等。
4、高效液相色譜柱為什么會(huì )失效？
4.1 填充不 良的色譜柱，對于填充不 良的色譜柱，填充床的壓縮通常會(huì )導致柱頭塌陷，使用一段時(shí)間后會(huì )導致柱效突然下降。色譜柱的初始評價(jià)指標，如塔板數、不對稱(chēng)因子等，往往不能很好地表征色譜柱床的穩定性。這種情緒只能在實(shí)際應用中找到。
4.2 壓力因素高效液相色譜柱在使用過(guò)程中突然的壓力波動(dòng)、機械沖擊或溫度的突然變化都會(huì )影響柱床，導致峰形變差，柱效降低。在進(jìn)樣過(guò)程中，進(jìn)樣閥旋轉過(guò)慢會(huì )引起壓力波動(dòng)，色譜柱床層出現裂紋，換柱時(shí)也會(huì )出現同樣的問(wèn)題。使用填充良好的色譜柱并在較低的柱壓下操作，可以大大減少壓力波動(dòng)造成的色譜柱損壞。
4.3 篩板堵塞色譜柱入口篩板堵塞是高效液相色譜柱的常見(jiàn)問(wèn)題之一，會(huì )引起柱壓升高、色譜峰拖尾、塔板數減少等問(wèn)題。通常，分析樣品中的顆粒雜質(zhì)可能會(huì )堵塞色譜柱的入口。
因此，分析需要先過(guò)濾或離心。乳白色或混濁樣品應使用 0.25 m 濾膜處理，或使用注射器過(guò)濾器。噴射器和泵密封件的磨損也會(huì )帶來(lái)顆粒。在進(jìn)樣閥和色譜柱之間使用 0.25 μm 或 0.45 μm 的在線(xiàn)過(guò)濾器通?？梢员苊獯祟?lèi)問(wèn)題。
4.4 樣品組分的強保留強吸附的樣品組分吸附在柱頭填料上，會(huì )嚴重影響液相高效液相色譜柱的使用壽命。生物組織或體液的提取物、天然產(chǎn)物等復雜樣品，容易造成柱頭污染。比較純的樣品一般沒(méi)有這個(gè)問(wèn)題。在色譜柱應用中，色譜峰的嚴重拖尾或分裂通常是柱頭吸附強保留污染物的表現。
5、如何清洗高效液相色譜柱？
一般的反相色譜，經(jīng)常使用緩沖鹽。白鹽對色譜柱的危害更大。如果鹽卡在色譜柱中，則色譜柱無(wú)用。所以需要洗掉。請記住，每次都需要沖洗干凈。如果色譜柱的流動(dòng)相中沒(méi)有鹽，則無(wú)需沖洗。
洗滌方法：反相柱儲存在純甲醇或純乙腈中，但鹽不溶于純有機相。因此，中間過(guò)渡使用甲醇水或乙腈水。
具體使用什么取決于您的流動(dòng)相。例如，我們可以使用磷酸鹽緩沖液-乙腈（70:30）的流動(dòng)相，所以洗滌時(shí)，用10%-15%的乙腈水，1.0ml/min洗滌，至少30min。如果第2天繼續使用，則不需要用純甲醇或純乙腈密封。如果第2天不使用，用純有機相密封柱子，以1.0ml/min的相同流速沖洗30分鐘。另外，也不是說(shuō)不清洗就壞了。它會(huì )縮短使用壽命。
