由于高效液相色譜具有速度快、分離效果好、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn),因此應用越來(lái)越廣泛。 HPLC色譜柱是HPLC系統的重要組成部分。 使用時(shí)需謹慎使用,使用后必須進(jìn)行保養,以免下次使用出現問(wèn)題。 色譜柱的頻繁更換是非常昂貴的,因此為了節約成本,需要更大程度的延長(cháng)色譜柱的使用壽命。 同時(shí),必須小心維護色譜柱,以保持每次獲得結果時(shí)的準確性和一致性。 廣州綠百草編輯總結了7個(gè)關(guān)于色譜柱的誤區,希望能延長(cháng)使用壽命。
誤區一:HPLC色譜柱不能反吹
一般情況下, 液相色譜柱的設計耐壓值遠高于ZUI大工作壓力。更換柱子時(shí),反吹可以清 除柱頭一些吸附性強的物質(zhì),我們把這些殘留的物質(zhì)沖掉,防止壓力升高。但是如果你買(mǎi)的色譜柱在柱頭使用大粒徑填料,反吹時(shí)這部分填料會(huì )被沖掉。因此,在選擇是否反吹之前,您必須檢查您使用的液相色譜柱。
誤區二:所有C18列都一樣
在早期的HPLC系統中,C18是標準反相色譜的鍵合固定相,因此C18被用作反相色譜柱的標準。然而,時(shí)代不會(huì )停滯不前。人們對科學(xué)的追求和認識越來(lái)越深刻,出現了更多的固定相,許多C18色譜柱也誕生了 。雖然也使用硅膠作為基質(zhì),但各有其特定的填料鍵合合成工藝,因此色譜性能不同。所以?xún)H僅因為名稱(chēng)都是C18列,認為性能是一樣的是錯誤的。
誤區三:空氣一旦進(jìn)入色譜柱就會(huì )損壞
我們都知道,當色譜柱沒(méi)有連接到色譜儀時(shí),要保證色譜柱密封嚴密。 但在實(shí)際應用中,即使有少量空氣進(jìn)入色譜柱末端,也不是什么大問(wèn)題。色譜柱與色譜儀連接使用時(shí),在系統初始加壓過(guò)程中,空氣會(huì )在短時(shí)間內被溶劑擠出。因此,不要僅僅因為少量空氣進(jìn)入色譜柱就認為色譜柱已損壞。
誤區四:不需要保護柱
事實(shí)上,使用保護柱有很多優(yōu)點(diǎn)。高效液相色譜的流動(dòng)相中常使用各種試劑,其中混有一些不溶或不純的物質(zhì)。大多數不溶物可以通過(guò)用篩子或膜過(guò)濾器過(guò)濾流動(dòng)相來(lái)去除,但不能完全過(guò)濾非常細的顆粒。另外,流動(dòng)相調制后,不溶、不純的物質(zhì)有可能通過(guò)空氣、容器、人體等落下,這些不溶、不純的物質(zhì)會(huì )污染色譜柱、堵塞色譜柱,或對色譜柱產(chǎn)生**影響。對分析的影響。
此時(shí),通過(guò)在色譜柱前安裝分析保護柱,可以防止其產(chǎn)生,保護色譜柱。與更換昂貴的分析柱相比,添加或更換保護柱只需很少的費用。液相色譜保護柱幾乎沒(méi)有死體積,更換方便。適用于UHPLC系統的高壓,截留那些強保留且不可吸附的化合物。樣品和流動(dòng)相的過(guò)濾可以保持保護柱對化學(xué)污染物的吸附能力,更長(cháng)時(shí)間地保持柱效,延長(cháng)色譜柱的使用壽命。
誤區五:反相色譜柱不能使用純水相
當使用低有機溶劑含量或純水作為反相色譜柱的流動(dòng)相時(shí),一些色譜工作者會(huì )遇到相塌陷。因此,有人認為反相色譜柱不能使用純水。但實(shí)際上,市面上銷(xiāo)售的反相色譜柱(如極性包埋柱和極性封蓋柱)都是親水性的,其表面特性允許使用純水,不會(huì )造成塌陷或保留時(shí)間偏移。
誤區六:粒徑越小,柱填料壓力越高,分離效果越好
色譜柱的性能不能僅僅通過(guò)填料是否超小粒徑和超高柱壓來(lái)評價(jià)?,F代對色譜柱柱特性的研究越來(lái)越深入,已經(jīng)開(kāi)發(fā)出一些提高色譜柱效率的方法。例如,新型表面多孔材料色譜柱的柱效與亞 2μm UHPLC 色譜柱一樣好。與傳統色譜柱相比,它的柱壓非常低。
誤區七:柱壓不會(huì )影響色譜分離效果
近年來(lái),柱壓?jiǎn)?wèn)題引起了眾多色譜工作者的關(guān)注。色譜圖的很多參數受柱壓影響,包括一些溶質(zhì)的摩爾體積、滯留體積、柱孔隙率、保留因子和流動(dòng)相等。如果在13.789MP的壓力下操作色譜柱,即使保留時(shí)間差異很小。但是,當柱壓接近2000psi(13.789MPa)時(shí),柱壓的影響可能比較明顯。
結論 近幾十年來(lái),高效液相色譜已廣泛應用于生命科學(xué)、藥 物分析、食品分析、環(huán)境監測等領(lǐng)域。人們對液相色譜的不斷研究也產(chǎn)生了更多的液相色譜應用、解決方案和方法等,相信未來(lái)液相色譜的應用領(lǐng)域會(huì )更加廣闊。